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      CRISPR/Cas9

      CRISPR/Cas9

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      CRISPR/Cas9 是一种能够对基因组的特定位点进行精确编辑的技术。。其原理是核酸内切酶Cas9蛋白通过导向性RNA（guide RNA, gRNA）识别特定基因组位点并对双链DNA进行切割，，，，造成DNA双链断裂，，，，细胞利用非同源末端连接(Non homologous End Joining，，NHEJ）或者同源重组（Homologous Recombination, HR）方式对切割位点进行修复，，，，实现DNA水平基因敲除或精确编辑。。。
      　　CRISPR/Cas9 系统主要由两部分组成：
      　　1. 单链的guide RNA（single-guide RNA，，，sgRNA）
      　　2. 有核酸内切酶活性的Cas9 蛋白

       CRISPR基因敲除

      　　以基因敲除为目的时，，可以利用Cas9-sgRNA对DNA进行切割产生双链断裂，，，，随后细胞通过非同源末端连接方式修复DNA，，在此过程中，，，，将随机引入碱基的缺失或增加，，，基因发生移码突变，，，导致编码基因的敲除。。。。　　

      CRISPR基因编辑　　

      　　以基因敲入或替换为目的时，，需要借助同源重组原理。。。CRISPR/Cas9系统中的Cas9-sgRNA在靶位点进行切割产生DNA双链断裂，，，在模板DNA存在时，，，，细胞通过同源重组方式修复DNA，，，，而模板DNA可以被人为设计成需要插入的基因或需要修复的基因，，，，此时细胞编码目的基因。。。

      载体的选择（部分）

      　　提供病毒载体的含Cas9蛋白的单载和双载系统，，，，可根据目的基因序列设计多条gRNA，，载体带有多种荧光抗性标记，，，方便筛选。。。。
      载体类别 编号 载体元件
      CRISPR慢病毒单载体 H5070

      pLenti-U6-spgRNA v2.0-CMV-Puro-P2A-3xFLAG-spCas9-WPRE
      H7072

      pLenti-U6-spgRNA v2.0-CMV-BSR-P2A-3xFLAG-spCas9-WPRE
      H6825

      pLenti-U6-spgRNA v2.0-CMV-sfGFP-P2A-3xFLAG-spCas9-WPRE
      CRISPR慢病毒双载体 H5068

      pLenti-U6-spgRNA v2.0-CMV-EGFP-WPRE
      H5450

      pLenti-CMV-Puro-P2A-3xFLAG-espCas9_1.1-WPRE
      CRISPR  AAV单载体系统 H6941

      pAAV-CMV-SaCas9-U6-sagRNA v2.0
      H5273

      pAAV-hSyn-SaCas9-U6-sagRNA v2.0
      CRISPR  AAV双载体系统 H6291

      pAAV-CMV-EGFP-WPRE-U6-spgRNA v2.0

      H12663

      pAAV-U6-shRNA/spgRNA v2.0-CMV-EGFP-WPRE

      H11012

      pAAV-CMV-Luc2-WPRE-U6-spgRNA

       病毒载体服务流程
       

      • 物种及目的基因名称
        病毒载体要求与选择
        其它特殊需求
      • Cas9病毒载体构建
        病毒包装与纯化
        滴度测定
      • 高滴度的病毒颗粒
        按合同提供对照病毒
        实验报告
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