操作指南 | AAV感染胰腺注射tips

❶ 将麻醉后的小鼠仰卧位固定，，持续给予异氟烷。。。

❷ 去除小鼠下胸部及腹部毛发，
，，，暴露皮肤，，，用70%乙醇纱布反复擦拭，，清洁并消毒手术区域。。。。

❸ 在上腹部正中做1.5cm切口，，注意避免损伤腹腔内器官
。
。。。

❹ 用无菌棉签轻柔牵拉胃，
，，展开十二指肠，，，暴露胆胰管及其与十二指肠的结合部（即Oddi括约肌）
。
。。
。腹腔外的肠管用温生理盐水浸湿的无菌纱布覆盖，，避免组织干燥与热量流失。。。。

❺ 在胰管分支上方的胆总管处放置微夹钳，，阻断胆总管通路，，，
，防止输注液反流进入肝脏。。

❻ 用30G针头在Oddi括约肌对侧的十二指肠壁制作微小穿刺孔
，，，
，再将31G钝头导管经十二指肠壁穿刺孔穿过Oddi括约肌，
，导管尖端定位于胆胰管的胰管分支起始处；若解剖结构不清晰，，，，尖端仅需刚过Oddi括约肌即可。。

❼ 用微夹钳夹在Oddi括约肌处，
，防止输注过程中液体反流、、、、渗漏。。。
。通过导管缓慢匀速注入AAV。。

❽ 注射完成后，，，先移除Oddi括约肌处的微夹钳，，，，轻柔拔出导管，
，，再移除胆总管处的微夹钳。
。。

❾ 缝合十二指肠壁的穿刺孔；将肠管放回腹腔，，再逐层缝合腹壁肌肉层与皮肤。。

❿ 术后将小鼠放回铺有37℃恒温加热垫的饲养笼中，，，单笼饲养直至完全苏醒，，，全程保温。。。。

胰管注射操作示意图

（Xiangwei Xiao, Nat Protoc., 2014）

❶ 提起小鼠尾巴，，，，将其放在鼠笼盖或其他粗糙表面上。。。

❷ 小鼠向前挣扎爬行时，，
，再用左手拇指和食指抓住鼠耳和颈部皮肤。。。

❸ 小鼠于手心中后，，，用无名指和小指夹其背部皮肤和尾部，，腹部向上，，，，头呈低位
。。。

❹ 一手持注射器
，，，另一手抓紧背部皮肤使腹部皮肤紧绷，，，在小鼠两大腿根连线与腹中线交叉点一侧约0.3-0.5cm位置（偏左/偏右）刺入皮下。。。

❺ 针头到达皮下后，，，，沿皮下向前推进2-3cm，，，然后注射器针头与皮肤呈45°角刺入腹膜，，，慢慢感觉到抵抗力消失，，即可快速推注病毒液体。。。。

❻ 注射完毕后，
，轻轻将针头旋转一定角度，，，缓慢拔出针头，
，，防止液体外漏，，，切记快进针、、
、、缓出针。。。。

※ 注意：靠近胰腺处进行腹腔注射效果更佳哦！
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